PARPtrap Assay Kit for PARP1检测原理
点击次数：23 更新时间：2025-09-10
PARPtrap Assay Kit for PARP1是一种基于荧光偏振（Fluorescence Polarization, FP）技术的高通量筛选（High-Throughput Screening, HTS）试剂盒，用于测量 PARP1/DNA 复合物的形成。PARP1（多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1）通过其 DNA 结合结构域与受损 DNA 结合，激活后在 NAD?存在的情况下进行自身核糖基化（auto-ribosylation），导致 PARP1 从 DNA 上解离。然而，在某些抑制剂存在时，PARP1 无法从 DNA 上解离，形成被困的 PARP-DNA 复合物，这种复合物对癌细胞具有高度毒性。
一、检测原理
1、PARPtrap Assay Kit for PARP1基于荧光偏振（Fluorescence Polarization, FP）技术，通过检测 PARP1 与 DNA 的结合和解离来评估 PARP1 的活性。试剂盒的主要组分包括：
- 荧光标记的寡核苷酸双链体：作为 DNA 损伤的模拟物，用于与 PARP1 结合。
- 纯化的重组 PARP1 酶：用于实验中的酶反应。
- NAD⁺：作为 PARP1 自身核糖基化的底物。
- PARPtrap 检测缓冲液：提供适宜的反应环境。
2、检测原理如下：
- 荧光探针结合：荧光标记的寡核苷酸双链体与 PARP1 结合，形成大的复合物，导致高偏振光的发射。
- 自身核糖基化与解离：加入 NAD⁺后，PARP1 进行自身核糖基化，随后从寡核苷酸双链体解离，双链体自由旋转，导致偏振光减少。
- 抑制剂作用：在 PARP1 抑制剂存在时，PARP1 被捕获在荧光寡核苷酸双链体上，荧光偏振（FP）信号增加，且这种增加与抑制剂的浓度和效力成正比。
二、应用领域
- 药物研发：用于筛选和分析能够增强 PARP1/DNA 捕获的小分子，助力药物发现和高通量筛选（HTS）应用。
- IC50 测定：可用于测定抑制剂的 IC50 值。
- 科研：仅用于科研目的，不可用于临床诊断。
三、五、实验设备要求
- 可调节的微量移液器和无菌吸头。
- 旋转或摇摆平台。
- 能够测量荧光偏振的荧光微孔板读数器，激发波长 λex=470 nm（5 nm 带宽），检测发射波长 λem=518 nm（10 nm 带宽）。
PARPtrap Assay Kit for PARP1以其精准的检测原理、便捷的实验操作和广泛的应用前景，成为科研工作者在 PARP1 相关研究中的重要工具。
地址：上海静安区
邮箱：271064315@qq.com
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