CD8+ TCR Knockout NFAT报告基因细胞系

TCR（T 细胞受体）蛋白复合物存在于 T 细胞表面，负责识别与 MHC（主要组织相容性复合物）分子结合的抗原。 TCR 的刺激会导致下游 NFAT（激活 T 细胞核因子）信号的激活。 NFAT 是一个转录因子家族，在免疫反应中具有重要功能，例如通过诱导 T 细胞中各种细胞因子（例如白细胞介素 2 至 4 和 TNF-α）的表达。 NFAT 受 Ca2+ 和 Ca2+/钙调蛋白依赖性磷酸酶钙调神经磷酸酶调节。

TCR 由两条不同蛋白质链的异二聚体组成，其中 α (α) 和 β (β) 链是主要链。 使用CRISPR/Cas9基因组编辑去除α链和β链的TRAC（T细胞受体α常数）和TRBC1（T细胞受体β常数1）区域，导致TCR丢失。

该细胞系是通过使用慢病毒转导（CD8a 慢病毒，BPS Bioscience #78648）外源过度表达人 CD8 (NM_001768.6)，从 TCR 敲除 NFAT 荧光素酶报道 Jurkat 细胞系 (BPS Bioscience #78556) 生成的。 为了实现 TCR（T 细胞受体）的敲除，通过 CRISPR/Cas9 基因组编辑从重组体中去除 TCRα/β 链的 TRAC（T 细胞受体 Alpha Constant）和 TRBC1（T 细胞受体 Beta Constant 1）结构域。 Jurkat 细胞在 NFAT 反应元件的控制下稳定表达萤火虫荧光素酶基因。

通过基因组测序和流式细胞术证实了TCR敲除NFAT-荧光素酶报告基因Jurkat细胞中的TCRα/β敲除，并通过流式细胞术证实了CD8的表达。 该细胞系已经过功能验证，与亲本 NFAT-荧光素酶报告 Jurkat 细胞 (BPS Bioscience #60621) 不同，该细胞系不会对抗 CD3 激动剂抗体产生反应。